Czy to nikiel?

Kurcze, mam braki w biotechnologii.. W końcu jestem mgr chemii i niestety czasem mi teraz ciężko i brakuje podstaw z biotechnologii. Co to jest to żółte na żelu SDS, wymywa mi się z kolumny, barwi frakcje. Może jakiś biotechnolog mnie czyta i mógłby odpowiedzieć. Czy kolumna jest przeładowana i to wymywa się nikiel? Czy to tylko z przeładowania, czy przez EDTA z buforu do dializy? Ale EDTA było mało, 0.5mM. Help :(

Robiłam dializę mojego białka COMT z proteazą TEV, żeby odciąć His-Tag. To po odcięciu powinno się wymywać we flow through (faza ruchoma), a nie odcięte i proteaza zostaje w kolumnie i wymywa się po użyciu buforu z imidazolem. Proteaza widoczna na drugim żelu od E7 do E14, to pod spodem to moje białko, nie wiem co to jest to na górze - E6 - E9 (ale może to być po prostu dimer mojego białka, COMT ma 24.4 kDa, a to jest coś mniejsze niż 50 kDa).

Dialysis buffer:

50mM Tris-HCl, pH=8, 0.5mM EDTA, 1mM DTT  - 3h15min in room temp., 22.5h in cold room

Equilibration buffer:

50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol

Ni-IDA, capacity: 10-15 mg protein/mL of resin; 10mL column

Column color changed after sample application. Colour went down during elution.

Elution buffer:

50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol, 250mM imidazole

Eluted fractions:

Flow through:

Elution: